جداسازی و همسانه سازی (cloning) cdna ژن منگنز پراکسیداز (mnp) از قارچ خوراکی دکمه ای سفید (agaricus bisporus)، مقدمه ای بر دست ورزی ژنتیکی

تولید و پرورش قارچ خوراکی، یکی از کاربردهای تجاری فناوری های میکروبی به منظور تبدیل زیستی ضایعات بخش کشاورزی به فرآورده های با ارزش غذایی است. در قارچ­ خوراکی دکمه ای ( agaricus bisporus ) آنزیم های مختلفی از ابتدای رشد میسلیومی تا انتهای دوره میوه­دهی، تجزیه ترکیبات لیگنینی را در محیط کمپوست برعهده دارند. یکی از مهمترین این آنزیم ها، آنزیم منگنز پراکسیداز است که سهم عمده­ای در تجزیه ترکیبات لیگنینی دارد. به منظور انجام مطالعات ملکولی بر روی آنزیم منگنز پراکسیداز در قارچ خوراکی دکمه­ای سفید نژاد im008 و آماده نمودن زمینه برای افزایش تولید این آنزیم در قارچ خوراکی دکمه­ای، اقدام به جداسازی و همسانه سازی cdna ژن کدکننده آنزیم منگنز پراکسیداز گردید. برای این منظور استخراج rna از میسلیوم­های رشد یافته قارچ خوراکی بر روی محیط کشت مایع عصاره کمپوست انجام شد و cdna آن به وسیله آنزیم رونوشت بردار معکوس ساخته شد. پس از تکثیر قطعه مورد نظر به وسیله واکنش زنجیره ای پلیمراز، قطعه تکثیرشده در ناقل ptz57r/t قرار گرفت و سپس به باکتری e.coli سویه dh5α منتقل گشت. پس از استخراج پلاسمید از باکتری های تراریخته، پلاسمید استخراج شده مورد هضم آنزیمی قرار گرفت و در مرحله آخر قطعه تکثیرشده تعیین توالی شد. در نتایج، بلاست توالی نوکلئوتیدی در مکان­های بازهای نوکلئوتیدی با شماره های 657 و 850 با توالی ژن mnp موجود در بانک اطلاعاتی ncbi تفاوت داشت که به ترتیب، سبب تغییر اسید آمینه­ ایزولوسین به والین و اسید آمینه سرین به آلانین در توالی اسیدآمینه قطعه cdna همسانه شده، می­شود.